Detección de Listeria spp. y Listeria monocytogenes en muestras de leche cruda y quesos artesanales respectivamente, mediante PCR en Tiempo Real

Detección de Listeria spp. y Listeria monocytogenes en muestras de leche cruda y quesos artesanales respectivamente, mediante PCR en Tiempo Real

Contenido principal del artículo

Viviana Pamela Chiluisa-Utreras
María Alexandra Cabrera-Rodríguez
Priscila Karina Valladares-Torres

Resumen

Resumen

Antecedentes.En Ecuador, los estudios sobre las bacterias del género Listeria son escasos en quesos artesanales y enleche cruda prácticamente inexistentes. La producción de leche es una de las principales actividades ganaderas en la provincia de Pichincha y se hace indispensable el estudio de estos productos. Siendo todos los cantones que conforman Pichincha, productores de leche, se muestrea al azar tres de ellos, Cayambe, Quito y Pedro Moncayo.Objetivo. Determinar Listeria spp. y Listeria monocytogenesen muestras de leche cruda y quesos artesanales respectivamente,mediante PCR en Tiempo Real. Métodos. La aplicación de la técnica qPCR en la detección de microorganismos y sobre todo de bacterias en alimentos, se basa en cuatro aspectos fundamentales: su sensibilidad, especificidad, rapidez y capacidad de procesamiento de gran flujo de muestras. Es posible detectar pequeñas cantidades de microorganismos patógenos, como es el caso deListeria spp. en leche cruda, previa extracción y cuantificación de ADN total. Resultados.En este estudio en leche cruda,se determinó 1 positivo de un total de 60 muestras, que representa el 1.6% de Listeria spp. y 16 muestras positivas de 45, que representa el 35.6 % de Listeria monocytogenes en quesos artesanalesde tres haciendas de la provincia de Pichincha. Conclusiones. Los resultados, de acuerdo a los análisis estadísticos realizados con la prueba de Kruskal – Wallis, demuestran que en Pichincha se encuentra presente la bacteria en leche cruda, pero en cantidades no representativas, mientras que paraListeria monocytogenes existe significancia estadística en las muestras de quesos artesanales.

Palabras clave: Ecuador, Leche Cruda, Listeria,PCR en Tiempo Real, quesos artesanales.

Abstract

Background. In Ecuador, studies about bacteria genre Listeria in artisanal cheeses are scarce, and in raw milk, practically nonexistent. Milk production is one of the main livestock activities in the province of Pichincha and it is essential to study these products. Since all the cantons that make up Pichincha are milk producers, three of them, Cayambe, Quito and Pedro Moncayo were randomly sampled. Objective. To determine Listeria spp. And Listeria monocytogenes in samples of raw milk and artisanal cheeses, respectively, using Real Time PCR. Methods. The application of the qPCR technique in the detection of microorganisms and especially of bacteria in food, is based on four fundamental aspects: its sensitivity, specificity, speed and processing capacity of large sample flow. It is possible to detect small amounts of pathogenic microorganisms, such as Listeria spp in raw milk, after extraction and quantification of total DNA. Results. In this study in raw milk, one positive was determined from a total of 60 samples, representing 1.6% of Listeria spp. and 16 positive samples of 45, representing 35.6% of Listeria monocytogenes in artisanal cheeses from three farms in the province of Pichincha. Conclusions. The results, according to the statistical analyzes carried out with the Kruskal - Wallis test, show that in Pichincha the bacterium is present in raw milk, but in non - representative quantities, whereas for Listeria monocytogenes there is statistical significance in the cheeses samples.

Key words: Ecuador, Raw Milk, Listeria, Real Time PCR, Artisanal cheeses.

Resumo


Antecedentes. No Equador, estudos sobre a bactéria do gênero Listeria são escassos em queijos artesanais e em leite cru praticamente inexistentes. A produção de leite é uma das principais atividades pecuárias na província de Pichincha e é essencial estudar esses produtos. Como todos os cantões que compõem Pichincha, produtores de leite, são amostrados aleatoriamente três deles, Cayambe, Quito e Pedro Moncayo. Objetivo. Determine Listeria spp. e Listeria monocytogenes em amostras de leite cru e queijos artesanais, respectivamente, utilizando PCR em tempo real. Métodos. A aplicação da técnica qPCR na detecção de microorganismos e especialmente de bactérias nos alimentos, baseia-se em quatro aspectos fundamentais: sua sensibilidade, especificidade, velocidade e capacidade de processamento de grande fluxo de amostra. É possível detectar pequenas quantidades de microorganismos patogênicos, como Listeria spp. em leite cru, extração prévia e quantificação do DNA total. Resultados. Neste estudo, no leite cru, 1 positivo foi determinado a partir de um total de 60 amostras, representando 1,6% da Listeria spp. e 16 amostras positivas de 45, representando 35,6% de Listeria monocytogenes em queijos
artesanais de três fazendas na província de Pichincha. Conclusões. Os resultados, de acordo com as análises estatísticas realizadas com o teste de Kruskal - Wallis, mostram que, em Pichincha, a bactéria está presente no leite cru, mas em quantidades não representativas, enquanto que para Listeria monocytogenes há significância estatística nas amostras de queijo ofícios

Palavras-chave: Equador, leite cru, Listeria, PCR em tempo real, queijos artesanais.

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.

Detalles del artículo

Biografía del autor/a (VER)

Viviana Pamela Chiluisa-Utreras, Universidad Politécnica Salesiana

Magíster en Biología de la Conservación

Grupo de Investigación BIOARN

María Alexandra Cabrera-Rodríguez, Universidad Politécnica Salesiana

Ingeniera en Biotecnología de los RRNN

Priscila Karina Valladares-Torres, Universidad Politécnica Salesiana

Ingeniera en Biotecnología de los RRNN

Referencias (VER)

EL TELÉGRAFO, «Producción lechera mueve $700 millones al año,»

Septiembre 2013. [En línea]. Available: http://www.telegrafo.com.ec/economia/item/produccion-lecheramueve-700-millones-al-ano.html. [Último acceso: 16 Marzo 2015].

R. Rojas y T. González, «Detección e Idetificación de Bacterias Causantes de Enfermedades Transmitidas por Alimentos mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa,» 2006. [En línea]. Available: http://www.medigraphic.com/pdfs/bioquimia/bq-2006/bq062e.pdf. [Último acceso: 16 marzo 2015].

L. Torres, «Estudio de Prefactibilidad para la Implementación de la

Producción y Comercialización de Leche Cruda en la Finca “La Floresta”

(Tesis de pregrado),» Quito, 2009.

L. Ramírez, A. Morón, A. Alfieri y O. Gamboa, «Detección de Listeria monocytogenes en queso blanco criollo, mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR),» ALAN (Archivos Latinoamericanos de Nutrición), vol. 60, nº 3, 2010.

P. Mera, «Evaluación de la calidad de leche mediante citometría de flujo, proveniente de bovinos de la parroquia de Machachi, provincia de Pichincha (Tesis de pregrado),» Quito, 2014.

M. Mena, «Evaluación de la prevalencia de Listeria monocytogenes en productos lácteos y embutidos en tres mercados de la ciudad de Quito mediante la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (Tesis de pregrado),» Quito, 2010.

B. Sánchez y E. Palencia, «Infecciones por Listeria,» 2010. [En línea]. Available: http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Listerias_Medicine2010.pdf. [Último acceso: 16 marzo 2015].

F. Acevedo, L. Navarro, L. Constantino, Z. Gil y P. Benavides, «Método rápido y económico para la extracción de ADN genómico en la broca del café y su uso en PCR.,» Cenicafé, vol. 58, nº 2, pp. 134-141, 2007.

G. Amagliani, C. Giammarini, E. Omiccioli, G. Brandi y M. Magnani,

«Detection of Listeria monocytogenes using a commercial PCR kit and

different DNA extraction methods.,» Food Control, vol. 18, nº 9, pp. 1147-1142, 2007.

V. Chiluisa-Utreras y A. Echeverria, «Identificación y cuantificación de Salmonella spp. y ADNr 16S bacteriano mediante PCR en Tiempo Real en muestras de alimentos.,» BIONATURA, pp. 1-6, 2017.

R. Schöbitz, M. Marín, M. Horzella y E. Carrasco, «Presencia de Listeria monocytogenes en leche cruda y quesos frescos artesanales.,» Agro Sur, vol. 29, nº 2, pp. 114-119, 2001.

R. Pagano, Estadística para las ciencias del comportamiento., Novena ed., vol. I, México D.F: CENGAGE learning, 2011, pp. 475-479.

P. Yánez, Biometría y Bioestadística Fundamentales, Autopublicación, 2010, pp. pp. 43-45;72-73.

E. Rahimi, H. Momtaz, A. Behzadnia y Z. Baghbadorani, «Incidence of Listeria species in bovine, ovine, caprine, camel

and water buffalo milk using cultural method and the PCR assay.,» Asian Pacific Journal of Tropical Disease, pp. 50-53, 2014.

F. Alba, «Pastos y Forrajes,» 2012. [En línea]. Available: http://www.agronomicosalesianopaute.edu.ec/des/modulos?download=32:ejq111. [Último acceso: 14 diciembre 2015].

H. McLaughlin, P. Casey, J. Cotter, C. Gahan y C. Hill, «Factors affecting survival of Listeria monocytogenes and Listeria innocua in soil samples,» Archives of Microbiology, vol. 193, nº 11, pp. 775-785, 2011.

A. Camacho, Y. Albarracín y P. Sarmiento, «Incidencia de Listeria

monocytogenes en leche de vaca expendida en el Municipio de Pamplona, Colombia.,» BISTUA, vol. 5, nº 2, pp. 49-57, 2007.

J. Ramírez, P. Rosas, M. Velásquez, J. Ulloa y F. Arce, «Bacterias lácticas: Importancia en alimentos y sus efectos en la salud.,» Revista Fuente, vol. II, nº 7, 2011.

H. Suárez, A. De Francisco y L. Beirao, «Influencia de las bacteriocinas producidas por Lactobacillus plantarum LPBM10 sobre la vida útil de filetes del híbrido de cachama Piaractus brachypomus x Colossoma macropomum empacado al vacío.,» Vitae, vol. 15, nº 1, 2008.

P. Ruegg, «Manejo Hacia la Calidad de la Leche,» 2004. [En línea]. Available: http://milkquality.wisc.edu/wp-content/uploads/2011/09/managing-for-milkquality_spanish.pdf.[Último acceso: 13 mayo 2015].

J. Vera, «Identificación y Evaluación de los factores que influyen en la calidad de leche de las fincas proveedores de la fábrica de quesos La Holandesa,» Quito, 2005.

J. Gallegos, G. Arrieta, M. Salim Máttar, R. Poutou, A. Trespalacios y A. Carrascal, «Frecuencia de Listeria spp., en Quesos Colombianos Costeños,» Revista MVZ Córdoba, vol. 12, nº 2, pp. 996-1012, 2007.